タグ: ギャル fc

Gal-GFPの構造と機能

IgG1 の Gal 末端 Fc 分子の構造は、X 線結晶構造解析によって特徴付けられています。 4 つの Cg2 ドメインが含まれており、そのうちの 2 つは C 末端にあります。これらのドメインは回転して Gal 末端グリコフォームを形成します。この作業は、これらのドメインの位置の多様性を明らかにし、より立体的な不均一性の可能性を強調しています。

Gal-ポリペプチド界面は、Glu258 カルボキシレートによって部分的に塞がれています。これは、Gal 残基がポリペプチド表面に限定されていないことを示唆しています。さらに、計算シミュレーションは、Gal 残基がポリペプチド構造に対して自由に移動できることを示しています。 Gal残基の糖鎖結合部位と付着部位は、Cg2ドメイン内に位置しています。これは、相関運動につながる相互作用が長い時間スケールで発生する可能性があることを示唆しています。このような相互作用の存在は、グリカン末端を修飾する酵素の能力にとって不可欠です。

Gal-GFP の動きを調べるために、一連の 2 次元計算シミュレーションを使用しました。まず、Cg2 グリカンの動きに関与するヒンジの位置を特定しました。次に、Fc のヒンジ領域には複数のドメイン間共有結合があり、この領域に影響を与える変異によって Cg2 の可動性が限定的に増加することがわかりました。

組換えヒトGAL/Fcを生成するために、GAL DNA配列をヒトIgG1分子のFc領域で補完した。得られたタンパク質は、345 アミノ酸を含むジスルフィド結合ホモダイマーであり、予測分子量は 38.5 kDa です。還元条件下では、タンパク質は 43 kDa の見かけの分子量を示します。プロテイン A 樹脂を使用して、GAL/Fc を最終濃度 16 mg/mL に精製します。